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自動(dòng)核酸提取儀常用的裂解液有哪些?

更新時(shí)間:2022-07-06瀏覽:1301次
  自動(dòng)核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來自動(dòng)完成樣本核酸的提取工作的儀器,核酸提取儀分為兩類:一類是大型的自動(dòng)化的,一般稱為自動(dòng)液體工作站;另一類是小型自動(dòng)核酸提取儀,利用封裝好的配套試劑自動(dòng)完成提取純化過程。
 
  它是以納米生物磁珠為載體的一種新型核酸提取技術(shù),核酸分子可與磁珠表面的硅羥基發(fā)生特異性識(shí)別與結(jié)合,在外部磁場(chǎng)的作用下發(fā)生聚集或分散,擺脫傳統(tǒng)核酸提取過程中離心、抽取上清液等手工操作流程,從而實(shí)現(xiàn)核酸的自動(dòng)化提取。廣泛應(yīng)用于臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。


  
 

磁珠法核酸提取一般包括裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫四個(gè)主要步驟,每一步驟又可由多種不同的方法單獨(dú)或聯(lián)合實(shí)現(xiàn),其中裂解環(huán)節(jié)是決定提取之質(zhì)量的重中之重,經(jīng)常也會(huì)有老師問到應(yīng)該如何對(duì)裂解液進(jìn)行優(yōu)化。那么,我們就來分析一下配置裂解液經(jīng)常用的試劑及其作用原理。
 
  1、鹽酸胍、尿素
 
  鹽酸胍在濃度為4-8mol時(shí)可斷裂氫鍵,有兩種可能機(jī)制:1、變性蛋白和鹽酸胍、尿素優(yōu)先結(jié)合,形成變性蛋白-變性劑復(fù)合物,當(dāng)復(fù)合物被除去,引起N-D反應(yīng)平衡向右移動(dòng),隨著變性劑濃度增加,天然狀態(tài)的蛋白不斷轉(zhuǎn)變?yōu)閺?fù)合物,導(dǎo)致蛋白質(zhì)*變性;2、鹽酸胍、尿素對(duì)氨基酸具有增溶作用,能形成氫鍵,當(dāng)濃度高時(shí),能破壞水的氫鍵結(jié)構(gòu),成為非極性殘基的較好溶劑,使蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水殘基伸展和溶解性加強(qiáng),鹽酸胍、尿素引起的蛋白變性往往是不可逆的。
 
  2、異硫氰酸胍
 
  蛋白質(zhì)變性劑,能迅速溶解蛋白質(zhì),導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎,核蛋白由于其二級(jí)結(jié)構(gòu)的破壞消失而迅速與核酸分離。在通常使用的蛋白質(zhì)變性劑中作用強(qiáng)的是異硫氰酸胍,它們可以使多數(shù)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換成一種隨機(jī)的卷曲狀態(tài)。含有強(qiáng)的陰離子和陽(yáng)離子基團(tuán),它們可以形成較強(qiáng)的氫鍵。在還原劑存在的情況下,異硫氰酸胍可以斷裂氫鍵,而去垢劑,如SDS存在的情況下,可以破壞疏水作用。

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