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組織研磨低溫均質(zhì)儀和手工液氮法研磨哪個(gè)更好?

更新時(shí)間:2021-12-21瀏覽:1169次
  組織研磨低溫均質(zhì)儀推出至今,越來(lái)越多用戶體驗(yàn)了其在組織DNA提取中相對(duì)于手工研磨的方便性及高效性,組織研磨低溫均質(zhì)儀與手工液氮法研磨后的新鮮組織樣本在DNA提取、RNA提取性能方面的差異,評(píng)估均質(zhì)儀的適用性。
 
  將10例FT樣本分別用吸水紙吸干表面的水分后,稱重后分裝為2管/例,20mg±0.3mg/管。向離心管內(nèi)加入300μl裂解液。將離心管放于液氮中,冷凍處理。
 
  液氮冷凍處理后的離心管固定于組織研磨低溫均質(zhì)儀適配器中,向離心管中加入2粒3mm磁珠。小心將適配器正確安裝至均質(zhì)儀上,設(shè)置研磨參數(shù):5輪循環(huán)數(shù),60s/輪,10s間隔。啟動(dòng)儀器,研磨組織。研磨后,再向離心管中加入300μl裂解液(裂解液總使用量為600μl)。
 
  取樣本放于研缽中,加入液氮后迅速研磨。將組織粉末轉(zhuǎn)移至離心管中,稱重后向其中加入600μl裂解液。將上述分別使用兩種研磨方法處理后的樣本,使用DNARNA共提試劑盒同時(shí)提取DNA和RNA。使用微量分光光度計(jì)測(cè)定DNA、RNA的濃度及純度。DNA提取后于-20℃保存,RNA于-80℃保存。
 
  均質(zhì)儀處理與手工液氮研磨處理后提取FT的DNA、RNA在濃度、純度上均無(wú)顯著性差異(成對(duì)檢驗(yàn)P>0.05)。但手工研磨有較大的樣本損失率,對(duì)于DNA提取濃度較低的樣品來(lái)說(shuō),均質(zhì)儀可以做到樣品0損失,在DNA提取上有著明顯的優(yōu)勢(shì),且手工處理的過(guò)程復(fù)雜、易交叉污染,操作所用時(shí)間等方面均不及均質(zhì)儀,因此均質(zhì)儀對(duì)于DNA提取工作相對(duì)于手工研磨處理有很大優(yōu)勢(shì)。

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